血清是否需要热灭活?
血清的最佳工作温度一般是在37℃左右,所以热灭火对于血清而言,也是一种不小的伤害,会导致一些营养成分流失,进而影响细胞状态。
但如果所用血清中含有补体,且所培养的细胞、所涉及的实验对补体相关的蛋白较为敏感,建议进行热灭活处理。
如何合理热灭活
必须要灭活,根据血清厂家多年来总结的经验,常规解冻后,40℃水浴加热20分钟即可,能够最大程度地保留营养成分。
另外,还有三个细节需要注意:
1.将血清用四步法彻底解冻后再进行热灭活。
步骤 |
温度 |
100m |
500ml |
第一步 |
4度 |
完全解冻 |
完全解冻 |
第二步 |
室温 |
10min |
20min |
第三步 |
20℃水浴 |
15min |
25min |
第四步 |
37℃水浴 |
20min |
35min |
2.为尽可能减轻热灭活对血清品质的影响,一次灭活的血清体积不宜过大。
3.温度需有对照
最好准备同样的容器装相等体积的水(初始温度与血清相同温度),灭活时将装有血清和水的容器同时放入40℃水浴,在装水的容器中放置温度计,加热过程中不时地轻轻旋转混匀血清,当温度计显示达到40℃左右,开始计时。