型号参数
凝胶型号 QAE-葡聚糖凝胶 A-25 QAE-葡聚糖凝胶 A-50 DEAE-葡聚糖凝胶 A-25 DEAE-葡聚糖凝胶 A-50
基质 交联葡聚糖 交联葡聚糖 交联葡聚糖 交联葡聚糖
类型 强阴离子 强阴离子 弱阴离子 弱阴离子
配基量 2-3 mmol/g 2-3mmol/g 2.5-4 mmol/g 2.5-4 mmol/g
颗粒大小 干粉 40-120μm 干粉 40-120μm 干粉 40-120μm 干粉 40-120μm
最大流速* 100cm/h 45cm/h 100cm/h 45cm/h
工作 pH 值 2-11 2-11 2-9 2-9
稳定性 0.1M 的酸碱以及常规缓冲液
层析柱 10mm*20cm,5 cm 柱床高度,流动相为水,25℃
使用方法
填料的准备
&.将干粉浸泡于纯水或缓冲液中,液体可以适当多加一些,室温下完全溶胀需 2 天(室温低的情况下可能时间要延长),或者用热水浸泡大约 4 个小时(直接倒进去即可,切记不要水浴)。完全溶胀后除去上清液以及上层少许漂浮物,用缓冲液彻底清洗填料。
装柱
&所有实验材料均需平衡至色谱层析操作的温度,所有的缓冲液进行脱气处理(填料不可以超声);
&检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。
&用去离子水清洗掉 20%乙醇保存液,用缓冲液配成匀浆。
&将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
&用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
平衡柱子
用上样的平衡缓冲液平衡柱子后即可上样。(当流出液的 pH 和电导值与起始缓冲液相同时层析柱即完全平衡)。
上样
样品应溶解在起始平衡缓冲液中,或者通过透析或脱盐的方法进行缓冲液置换,将样品缓冲液转移至起始平衡缓冲液。样品的粘度不应超过平衡缓冲液,上样前必须使用 0.45um 微孔滤膜对样品进行过滤。
洗脱
对于 DEAE 葡聚糖凝胶和 QAE 葡聚糖凝胶填料,一般使用盐浓度递增或 pH 值递减(线性或者阶梯梯度)的方式来进行洗脱。
再生
根据样品的性质,通常通过用高离子强度洗脱缓冲液,如 2M NaCl 对柱子进行洗涤,或改变缓冲液pH,然后在平衡缓冲液中重新平衡来进行再生。如果填料吸附性能发生改变,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不下来,则需要通过在位清洗程序 CIP 来清除。
在位清洗(CIP)
通过用 2-3 倍柱床体积的 0.1M NaOH 溶液在位清洗填料,随后立即用大量纯水彻底清洗直至中性,从
而除去沉淀的蛋白质、疏水结合的蛋白质和脂蛋白。
保存
未使用的填料,请室温密闭保存。使用完的填料,用纯水彻底冲洗,用然后保存在 20%乙醇中,4℃保存,不能冷冻。
注意事项
&上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。
&在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。
&不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。
&离子交换介质在选择层析柱时,避免使用细长柱,会增加实验操作压力。