G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度,因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。
产 品 名 称 球蛋白分离范围 应 用 最大耐压 MPa 粒径
葡聚糖凝胶 G-10 <700 缓冲液交换、脱盐,分离小分子,去除小分子 0.15 40-120um
葡聚糖凝胶 G-15 <1500 缓冲液交换、脱盐,分离小分子,去除小分子 0.15 40-120um
葡聚糖凝胶 G-25 1000-5000 工业上脱盐及交换缓冲液 0.15 50-150um
葡聚糖凝胶 G-50 1500-30000 多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定 0.10 50-150um
葡聚糖凝胶 G-75 3000-80000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定 0.016 40-120um
葡聚糖凝胶 G-100 4000-150000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定 0.0096 40-120um
葡聚糖凝胶 G-150 5000-300000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定 0.0096 40-120um
葡聚糖凝胶 G-200 5000-600000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定 0.0096 40-120um
使用参考
葡聚糖凝胶系列产品以干粉形式存在,使用前必须溶胀,在膨胀期间应避免过度搅拌,可能破坏填料,不要使用磁力搅拌器。
填料准备
&.将填料在过量去离子水或缓冲液中,室温条件下溶胀 48 小时以上(室温低的话时间要适当延长,另外需要注意每天换水,以免长菌),或用热水溶胀 4 小时(不要水浴!)。溶胀完毕后,如果上层有少量漂浮物,请去除。
&.将溶胀好的填料,所有的缓冲液等材料平衡至实验操作温度,对所有的缓冲液进行脱气处理(注意:填料不可以超声)。
装柱
&.检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。
&.将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
&.用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由重力沉降,沉降好之后连结好柱子。
平衡
上样前平衡层析柱至少 5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止。
上样
样品一定要离心或 0.45um 滤膜过滤后上样。凝胶过滤的上样量一般为不大于 5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在 1-2%的柱床体积,视分
离情况可以调整;脱盐时上样量可以适当增大一些,柱高的选择也与分离要求相关,柱子越高,分离效果相应越好,但是,柱高过高的凝胶柱会引起较大的反压,也应当尽可能避免。
洗脱方法
根据自己样品来选择适当的洗脱液。
在位清洗(CIP)
如果填料性能发生改变,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不下来,则需要通过在位清洗程序 CIP 来清除。方法是用 0.1 M 氢氧化钠在位清洗 2-3 个柱体积,随后立即用大量纯水彻底清洗直至中性。
保存
未处理的填料,室温密闭保存。使用完的填料,用纯水将柱子彻底冲洗,最后保存在 20%乙醇中,4℃保存。
注意事项:
&.上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会影响填料的正常使用。所有的缓冲液必需用 0.45um 的过滤器过滤。
&.在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。
&.不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。