葡聚糖凝胶 LH 系列是将葡聚糖凝胶羟丙基化,并且专门适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子,天然产物在有机溶剂中的纯化,例如类固醇,萜类化合物,脂质和低分子量肽。
流动相的常用溶剂为:水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。
形状 :球形
粒径(干粉): 100-200 目
最高流速 :150 cm/h
工作温度: 4~40 ℃
耐压: 0.2MPa
pH 值稳定性: 2~13(短时间,在位清洗)
pH 工作范围: 3-12
分离范围:4000~20000(球蛋白)
化学稳定性: 在大多数含水和有机洗脱液系统中稳定。在 pH2 以下不稳定,对强氧化剂也不稳定。
使用参考
填料的准备
&.葡聚糖凝胶 LH 系列以干粉形式存在,使用前必须溶胀,在膨胀期间应避免过度搅拌,不要使用磁力搅拌器,溶胀的程度将取决于所使用的溶剂体系,在室温条件下至少溶胀 24 个小时。
&.将溶胀好的填料,所有的缓冲液等材料平衡至实验操作温度。
装柱
&.检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。
&.将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
&.用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
&.打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。
注意:上述装柱方法可用于葡聚糖凝胶 LH 系列在大多数溶剂中的填充。在一些溶剂中,例如氯仿,葡聚糖凝胶 LH 系列比溶剂密度小,并在其中漂浮,则需用其他方法。
平衡
上样前平衡层析柱至少 5-10 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止。
上样
样品一定要离心或过滤后(0.45um 滤膜)上样。样品体积应在总柱床体积的 1-2%的范围内,视分离情况可以调整,柱高的选择也与分离要求相关,
柱长越高,分离效果相应越好,但是,柱高过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制。
洗脱
一般来说,流速越低,分辨率越好。
再生
通常通过用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗涤柱,如果改变条件,需要用新的洗脱液重新进行平衡操作。
保存
未使用的填料,室温密闭保存。使用完的填料,用纯水将盐分彻底冲洗,最后保存在 20%乙醇中,4℃保存。
注意事项:
&.上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。
&.在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。
&.不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。