使用说明：
细胞数量确定
Ø将细胞悬浮液（100μL/孔）接种在96洞孔板中。将板在潮湿的培养箱中预孵育（例如，在37℃，5％CO2下）。
Ø向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡，因为它们会干扰O.D.读数。
Ø将培养板在培养箱中孵育1-4小时，然后使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。
细胞增殖和细胞毒性测定
Ø将种子细胞以103-104个细胞/孔的密度在96孔板中在100μL培养基中培养，含有或不含有待测化合物。将细胞在CO2培养箱中于37℃培养24小时。
Ø将10μL不同浓度的待测物质加入板中。
Ø将培养板在培养箱中孵育适当的时间（例如，6,12,24或48小时）。
Ø使用重复移液器向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡，因为它们会干扰O.D.读数。
Ø将培养板在培养箱中孵育1-4小时。
Ø在读取印版之前，重要的是在轨道振动器上轻轻混合1分钟，以确保颜色均匀分布。
Ø使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。
数据分析
统计分析有几种方法，您可以选择使用O.D.值或细胞数量，我们提供其中一种方法。
细胞存活率（％）= [（As-Ab）/（Ac-Ab）]×100
抑制率（％）= [（Ac-As）/（Ac-Ab）]×100
As =实验孔吸光度（含有细胞，培养基，CCK-8和待测化合物的孔的吸光度）。
Ab =空白孔吸光度（含有培养基和CCK-8的孔的吸光度）。
Ac =对照孔吸光度（含有细胞，培养基和CCK-8的孔的吸光度）。
制作标准曲线
Ø 细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数。
Ø 使用培养基，等比稀释细胞悬液为一个浓度梯度，通常需要5-7个浓度梯度，每组几个复孔。然后接种细胞。（注意每孔的细胞数量。如果您将细胞悬液稀释在管中，在加入培养板的孔之前，请小心再次混匀细胞。每孔中细胞悬液的体积应该是一致的。）
Ø 培养直至细胞贴壁（通常2-4小时），然后每100 μl培养基加入10 μl CCK-8。继续孵育1-4小时，用酶标仪测量450nm处的吸光度。制作出一条以细胞数为X轴坐标，O.D.值为Y轴坐标的标准曲线。
可以基于该曲线确定待测样品的细胞数。使用此标准曲线的先决条件是培养检测条件相同。
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