产品简介：
Ø本产品采用独特的疏水膜技术，可以高效专一地吸附 DNA 片段，同时彻底去除琼脂糖凝胶的盐类，琼脂等杂质。本试剂盒适用于回收 100bp~20 kb 的 DNA 片段，回收效率高达 85%，每个吸附柱地 DNA 结合能力可达15~20μg。回收到的 DNA 片段可以直接用于连接、PCR 反应，酶切以及测序等。
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组份 |
BKM-CW-H50（50次） |
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Mini Column |
50 |
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2 ml Collection Tube |
50 |
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Buffer KG (Gel dissolving solution) |
50ml |
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Buffer KW (Wash solution ) |
使用前加入无水乙醇 50ml |
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Buffer KE (Elution solution) |
10ml |
使用说明：
1. 实验前准备工作：在实验开始前，详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分，50~65℃的温浴条件，1.5ml 离心管，5M NaAc pH5.2（可选）。
2. Buffer KW 第一次使用前请按瓶上标签加入50ml无水乙醇。每次使用后，请立即拧紧盖子。
3. Buffer KG 中包含了离液剂，操作该溶液时请戴上手套防护，避免溶液直接接触皮肤。
4. 离心机的离心力至少为10000 rpm，且所有离心步骤在室温进行。
操作步骤：
(一)吸附
1. PCR 反应结束后，从 PCR 反应管中将反应液移至干净的1.5ml离心管中，其中每20-100ul 反应液加入500ul的 Buffer KG，将混合液充分混合均匀，并检查混合液颜色是否为浅黄色。
注意:1)一般情况下，混合物的颜色维持浅黄色。如果颜色变为橙色或红色，需要加入 5ul 5 M NaAc (pH 5.2)调低 pH 值，使混合物的颜色恢复为正常的浅黄色。不调节混合液的颜色，将降低 DNA 的回收率。
2) 如纯化的 PCR 反应液体积超过100ul，加入4-5 倍体积的 KG。
2. 将混合液转移到已装好收集管的吸附柱内，于 12000 rpm 离心 1min。保留柱，弃去收集管中的过滤液，把柱套回收集管中。重复将收集管中的滤液再一次通过吸附柱(可选，可提高回收效率)，弃收集管中的滤液，将柱子套回收集管中。
注意: 如混合液体积过大，可分数次上柱，每次上样量不要超过 700 ul。（二）吸附
3. 将DNA/融胶液冷却至室温，然后全部转移至吸附柱内，室温 13000 rpm 离心1min。重复将收集管中的滤液再一次通过吸附柱（可选，可提高回收效率），弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管。
注意：如混合液体积过大，可以分成数次上柱，每次上样量不要超过 700 μl。
（二）漂洗
4. 向柱子中加入700μl Buffer KW，室温13000 rpm 离心 30s，弃去收集管中的过滤液，将空柱子套回2ml收集管内。
注意：Buffer KW 在首次使用之前必须加入 50 ml 无水乙醇，并置于室温下保存。
5. 室温下，最高转速或13000 rpm 离心 2 min，以甩干柱子基质残余的液体。
注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于 DNA 中，影响后续反应。
（三）洗脱
6. 把柱子装在一个新的1.5 ml离心管上，加入 30~50 μl 的 KE（可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0或纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0），65℃放置 2-5 min，13 000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。（也可以将 KE 预热至 65℃，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min）
注意：KE 体积具体取决于预期的终产物浓度，其可用灭菌的 10 mM Tris-HCl（pH 8.0）或纯水代替，纯水需预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0。第一次洗脱可以洗出 80%以上的结合 DNA。如果再洗脱一次，可以把残余的 DNA洗脱出来（不推荐）。
注意事项：
Ø如不慎接触皮肤可立即用大量的洗涤剂和清水清洗。
Ø为了您的安全和健康，请穿实验服并戴 一次性手套操作。
暂无使用说明!
暂无产品问答!
暂无参考文献
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