产品简介:
Ø本产品是非放射性发光系统,用于检测固定在膜上的蛋白,灵敏度高,背景低,最低检测灵敏度可达飞克级,适用于检测极微量的蛋白。发光信号较续时间较长,30min以后仍可维持75%的发光。
产品优势:
飞克级灵敏度—最低可检测飞克级以下的蛋白。
信号稳定—发光时间较长,能进行多次曝光,半小时以后仍可维持75%的发光。
信号强—发光信号比对碘苯酚增强的 HRP-鲁米诺检测体系得到极大增强。
使用说明:
Ø印迹膜制备:
执行常规电泳、转膜、HRP标记的抗体孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的发光底物,检测系统必须基于HRP酶标记的抗体。充分的洗涤对于降 低背景非常重要,所有步骤均在室温下完成。
ØECL工作液的配置:
在使用前取等量A液和B液混合均匀。在吸取A液和B液时需采用不同的新枪头。
Ø蛋白或核酸信号显现:
1)将混合液滴加至膜上,每平方厘米膜片至少使用100-200ul以覆盖全膜,小心赶尽气泡(注意不要在膜片表面形成气泡)。
2)用电子装置感光,或在暗室中用X光片曝光;
3)根据信号的强弱适当调整曝光时间,也可选择不同时间多次曝光,以达最佳效果。
注意事项:
Ø勿将ECL化学发光底物试剂盒暴露在阳光或强光下,否则会导致其失活;建议保存在棕色瓶中,并避免长时间暴露在阳光下。
Ø使用前配制ECL工作液,体积足够覆盖膜片即可;取A液和B液时一定要用不同的枪头,互相污染可能导致缓慢失活;配制完毕建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低;弃去使用过的混合试剂。
Ø蛋白点荧光较弱时可以适当延长曝光时间;使用过少的ECL工作液不利反应进行,为达节约目的可将膜剪小,但勿降低ECL工作液使用比例。
Ø使用生物素/亲和素体系时,避免使用脱脂奶粉作为封闭液,因为脱脂奶粉中含有多种内源性生物素,容易产生非特异性信号。
Ø避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
Ø金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。
Ø叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,应避免使用NaN3,如必须使用,浓度不要超过0.01%。
Ø为了您的安全和健康,请穿实验服并戴 一次性手套操作。