产品简介：
Ø本产品采用独特的疏水膜技术，可以高效专一地吸附DNA片段，同时彻底去除 琼脂糖凝胶的盐类，琼脂等杂质。本试剂盒适用于回收 100bp-20kb的 DNA 片段，回收效率高达85%，每个吸附柱地DNA结合能力可达 15-20 μg。回收到的 DNA 片段可以直接用于连接、PCR 反应，酶切以及测序等。
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组份 |
BKM-JHS-50（50次） |
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Mini Column |
50 |
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2 ml Collection Tube |
50 |
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Buffer KG (Gel dissolving solution) |
50 ml |
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Buffer KW (Wash solution ) |
使用前加入无水乙醇 50 ml |
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Buffer KE (Elution solution) |
10ml |
使用说明：
1. 实验前准备工作：在实验开始前，详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分，50-65℃的 温浴条件，1.5 ml离心管，5M NaAc pH5.2（可选）。
2. Buffer KW 第一次使用前请按瓶上标签加入50ml无水乙醇。每次使用后，请立即拧紧盖子。
3. Buffer KG 中包含了离液剂，操作该溶液时请戴上手套防护，避免溶液直接接触皮肤。
4. 离心机的离心力至少为10000rpm，且所有离心步骤在室温进行。
（一）切胶
1. 琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 片段，任何类型或等级的琼脂糖都可以适用。
注意：强烈建议使用新鲜的 TAE Buffer 作为电泳缓冲液。不要重复使用电泳缓冲液，否则会因其 pH 的升高而 减少产量。TBE 只能得到较低的产量。
2. 当所需 DNA 片段完全分离时，转移凝胶至紫外灯上，尽可能快地把所需地 DNA 片段切下来。
注意：紫外灯会损伤 DNA，所以切胶过程尽量迅速，减少紫外照射时间。且切胶时尽量把无目的 DNA 地多余凝胶切去。
3. 将带有目的片段的凝胶块转移至已称重地1.5 mL离心管中，称重，得出凝胶块地重量，加入3倍凝胶块
体积地 Buffer KG。凝胶块地体积可通过如下方法估计：当凝胶薄片的重量为 0.1g，其体积为 100 μl，依次类推。50-65℃（一般琼脂糖不能超过最高温度65℃，低熔点琼脂糖不超过55℃）水浴放置 5-10 min，期间颠倒混匀数次直至凝胶完全融化，并检查混合物的颜色是否仍为浅黄色。
注意：1）若回收目的 DNA 片段小于 500 bp，请加入 1.5 倍凝胶块体积的异丙醇，充分颠倒混匀。
2）在凝胶完全溶解之后，注意凝胶和 Buffer KG 混合物的颜色。一般情况下，混合物的颜色维持浅黄色。如果颜色变为橙色或红色，需要加入5μl 5 M NaAc（pH 5.2）调低 pH 值，使混合物的颜色恢复为正常的浅黄色。不调节混合物的颜色，将降低 DNA 的回收率。
（二）吸附
4. 将 DNA/融胶液冷却至室温，然后全部转移至吸附柱内，室温13000 rpm 离心1 min。重复将收集管中的 滤液再一次通过吸附柱（可选，可提高回收效率），弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管。
注意：如混合液体积过大，可以分成数次上柱，每次上样量不要超过 700 μl。
（三）漂洗
5. 向柱子中加入 700μl Buffer KW，室温13000 rpm 离心1 min，弃去收集管中的过滤液，保留柱。
注意：Buffer KW 在首次使用之前必须加入 50 ml 无水乙醇，并置于室温下保存。
6. 弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。（可选）重复用 70%乙醇洗涤柱子。室温13000 rpm 离心1min。
7. 弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。室温下，最高转速或 13000rpm 离心2 min 以甩干柱子基质残余的液体。
注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于 DNA 中，影响后续反应。
（四）洗脱
8. 把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上，加入30-50μl的KE（可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0或 纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0），65 ℃放置2-5 min，13000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。（也可以将 KE 预热至 65℃，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min）
注意：KE 体积具体取决于预期的终产物浓度，其可用灭菌的 10 mM Tris-HCl（pH 8.0）或纯水代替，纯水需预 先用 NaOH 调 pH 值至 8.0。第一次洗脱可以洗出 80%以上的结合 DNA。如果再洗脱一次，可以把残余的 DNA 洗脱出来（不推荐）。
注意事项：
Ø如不慎接触皮肤可立即用大量的洗涤剂和清水清洗。
Ø为了您的安全和健康，请穿实验服并戴 一次性手套操作。
暂无使用说明!
暂无产品问答!
暂无参考文献
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