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RIPA裂解液(强) (含蛋白酶抑制剂)

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BKM-RA-Q100
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产品简介: 

 

ØRIPA裂解液(强)适用于蛋白质激酶实验、免疫测定和蛋白质纯化的裂解液和洗涤缓

 

冲液,适合动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。

 

 

 

使用说明: 

Ø细胞样品 

融解RIPA 裂解液()混匀。取适当量的裂解液,在使用前加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。可根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂Cocktails。

1.贴壁细胞:弃培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触(一般情况下裂解液接触动物细胞1-2s后,细胞就会被裂解)。植物细胞宜在冰上裂解2-10 min。

2.悬浮细胞:离心收集细胞,轻轻涡旋或者弹击管底使细胞尽量分散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以便充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

3.细菌或酵母:取1 mL菌液或酵母液,离心去上清(或可使用PBS洗涤一次,充分去除液体),轻轻涡旋或者弹击管底把细菌或酵母尽量分散。加入100-200 uL裂解液,轻轻涡旋或者弹击管底以混匀,冰上裂解2-10min(如果希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解)。

充分裂解后,10000-14000g离心3-5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和IP等操作。

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