产品简介：
Ø本产品是一款高效、便捷的高质量第一链cDNA合成试剂盒,包含热稳定的M-MLV酶及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和随机引物等第一链cDNA合成所需的所有组分，仅需加入 RNA 模板和水即可开始反应。获得的cDNA 用于下游qPCR实验。
|
组份 |
BKM-RT-K100 |
|
All-in-one RT Mix |
400ul |
|
DNase |
2x50ul |
|
10xDNase buffer |
200ul |
|
Nuclease-Free Water |
2x1ml |
使用说明：
Ø针对基因组 DNA 含量低的 RNA 样品（推荐方案）
① 于冰上配制如下反应体系：
|
试剂 |
用量 |
|
RNA模板 |
50ng-1ug |
|
All-in-one RT Mix |
4ul |
|
DNase |
1ul |
|
Nuclease-Free Water |
To 20ul |
注：推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 37℃温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染；
④ 55℃温育 15 min；
⑤ 反应结束后，85℃温育 5 min 以终止反应；
⑥ 迅速将获得的 cDNA 置于冰上，用于后续实验；或立即保存于 -20℃。
Ø针对基因组DNA含量高的RNA样品
(1) 基因组 DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反应体系：
|
试剂 |
用量 |
|
RNA模板 |
50ng-1ug |
|
DNase |
1ul |
|
10xDNase buffer |
1ul |
|
Nuclease-Free Water |
To 10ul |
注：推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 37℃温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染；
注：若 RNA 中基因组 DNA 污染严重，可适当延长 37℃温育时间至 5 min。
④ 65℃温育 2 min，使 dsDNase 失活，冰上放置。
(2) 第一链 cDNA 合成
① 于冰上配制如下反应体系：
|
试剂 |
用量 |
|
实验（1）产物 |
10ul |
|
All-in-one RT Mix |
4ul |
|
Nuclease-Free Water |
To 20ul |
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 50℃温育 15 min；
注：若目标RNA不含Poly(A)结构，可预先25℃温育10 min。
④ 反应结束后，85℃温育5 min，以终止反应；
⑤ 将获得的cDNA溶液置于冰上，用于后续实验。
注：cDNA 溶液置于-20℃储存，建议不超过1周；置于-80℃可长期储存。
注意事项：
Ø尽量预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，不仅适用于包含Poly(A) 结构的真核生物 mRNA，也适用于不含 Poly(A) 结构的原核生物 RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。
暂无使用说明!
暂无产品问答!
暂无参考文献
扫码关注公众号
中文
英文
