产品简介:
本试剂可以从细胞、组织、细菌、酵母等样品中提取总RNA。
保存条件: 2-8°C 避光保存
使用说明:
A.样品处理
Ø贴壁培养细胞:10 cm2 的培养细胞中倒出培养液,并用PBS 洗涤一次,以除去尽可能多的过量溶液。
Ø悬浮细胞/酵母/细菌: 将悬浮培养的细胞与培养液一起倒入离心管中,以8,000 rpm 离心2 分钟,弃去上清液,然后加入50μl无菌水重悬细胞,直到没有明显的沉淀为止。
Ø组织: 将样品转移到用液氮预冷却的研钵中,用杵研磨组织,并在此期间连续添加液氮,直到将其研磨成粉末为止。
B.加入BioZol
Ø贴壁培养细胞:加入1 ml 的TRIzol,使裂解物均匀地分布在细胞表面,然后使用移液器吹干细胞。 将细胞裂解液转移至1.5ml EP 管中。
Ø悬浮细胞/酵母/细菌: 加入1ml BioZol。
Ø组织: 将磨碎的组织添加到含有1 ml BioZol 的1.5 ml EP 管中。
C.裂解样品
加入BioZol 后,将其翻转过来,直到细胞和组织粉末均匀分散而没有结块。 在室温下放置5 分钟,以完全分离核酸-蛋白质复合物。
D. 加入氯仿
加入200μl氯仿,剧烈摇晃15 秒,然后在室温下放置2 分钟。
E.离心分层
以13,000 rpm 离心10 分钟,然后将600μl无色上清液转移至新的1.5EP 管中。
F. 加入异丙醇
向上述600μl上清液中加入600μl异丙醇,用手腕将其上下颠倒几次,然后在-20°C 下放置5 分钟。
G.离心总RNA
以13,000 rpm 离心10 分钟,小心丢弃上清液,并保存底部总RNA 沉淀。
H.冲洗总RNA
向沉淀的每个试管中加入1ml 70%乙醇,上下颠倒数次,然后以13,000 rpm 离心5 分钟。 小心丢弃上清液并保存底部RNA 沉淀(可重复冲洗一次)。
I.挥发性残留乙醇
倒掉洗液,再次短离心10s 后,用10μl Tip 头吸干剩余的洗液,置于室温使乙醇挥发干净(~20min)。
J.溶解总RNA
每管加入20~100μl TE Buffer 或RNase Free H2O 溶解总RNA。
注意事项:
a. 尽量使用一次性塑料器皿,若用玻璃器皿,应在使用前用0.1%DEPC 水溶液在37°C 处理12h,然后在120°C 高压灭30min 以除去残留的DEPC。
b. 用于RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(180°C,60min)或使用上述方法进行DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装(也可以使用RNA 实验用的一次性塑料容器),使用的无菌水须用0.1%的DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。
c. RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用,避免混用后交叉污染。