产品简介：
Ø本产品与传统质粒提取方法比较，具有以下特点：
技术先进——采用独特 的疏水膜技术，有效地去除各种蛋白质和大部分 RNA；
使用安全——这是一个没有有机溶液污染的操作过程.
质量可靠——提取所得的质粒纯度高；
|
组份 |
BKM-ZL-X50（50次） |
|
Mini Column |
50 |
|
2 ml Collection Tube |
50 |
|
Buffer K1 (Cell resuspension solution) |
15 ml |
|
Buffer K2 (Cell Lysis solution) |
15ml |
|
Buffer K3 (Neutralization solution) |
20ml |
|
Buffer KW (Wash solution ) |
使用前加入无水乙醇 50 ml |
|
Buffer KE (Elution solution) |
15ml |
使用说明：
1. 实验前准备工作：详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分，2 ml 离心管以及 65 ℃的温浴条件。
2. Buffer KW 第一次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水乙醇。每次使用后，请立即拧紧盖子。
3. K2 在低温下可能会产生沉淀，可在 37 ℃温育数分钟待溶液澄清后即可使用。因 K2 中含有碱性成分，为减少被空气中 CO2 中和，请使用后立刻拧紧盖子。K3 使用前请预冷至 4 ℃。
4.加入 K2 和 K3 后的颠倒混匀的动作一定要轻柔，否则会影响质粒质量。加入 K3 后的离心条件最好是 4 ℃，其他离心条件室温即可。
操作步骤：
1. 取1.5-5.0ml 过夜培养的菌液，加入一新的 2ml 离心管中，室温 6000 rpm 离心 5 min 沉淀菌体。弃上清液。
注意：尽量将上清液倒干净，最后可倒扣于吸水纸上吸干残余上清液。
2. 向管中加入 250 μl Buffer K1，剧烈震荡细菌沉淀，将菌体完全打散。
注意：确保菌体沉淀完全散开，无可见细菌团块，否则会降低质粒的产量。
3. 向管中加入 250 μl Buffer K2，轻轻颠倒混匀 5-10 次。室温静置 2-5 min。
注意：1）颠倒的动作要轻柔，切勿剧烈震荡，且裂解时间不宜超过5 min，否则会导致基因组DNA断裂污染质粒。
2）当使用完 Buffer K2 以后，须盖紧瓶盖保存于室温，避免与空气中的 CO2 反应。
4.向管中加入350μl Buffer K3（可以预冷至4 ℃，也可以在常温），并温和地上下颠倒离心管10-20 次，直至形成白色絮狀沉淀。
5. 在4 ℃，12000 rpm 以上离心10 min，或者常温12000 rpm 离心3-4 min。
注意：提高离心速度和时间有利于沉淀贴壁更加紧密，但是常温下不宜离心时间过长，否则会使液体温度升高，造成质粒 DNA 降解。
6.小心将细胞离心的上清液转至吸附柱子内，室温 12000 rpm 离心 30s，使裂解液完全流过柱子。弃去收集管中的过滤液。
7. 把柱子重新装入 2 ml 收集管中，加入 700 μl Buffer KW 至柱子，室温 12 000 rpm 离心 1 min，弃去洗涤液。
注意：KW 在使用之前必须加入 50 ml 95%或者无水乙醇。Buffer KW 应置于室温下。
8.（可选）重复用 700 μl 70%乙醇（室温）洗涤柱子。室温 12 000 rpm 离心 1 min。
9. 弃收集管中的滤液，将空柱子套回 2 ml 收集管内。室温下，最高转速或者 13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。
注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于 DNA 中，影响后续反应。
10. 把柱子装在一个干净的 1.5 ml 离心管上，加入50μl Buffer KE （可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0）到柱基质膜的中央，室温放置 1-5 min，13000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。
注意：1）Buffer KE在65 ℃预热或者加入后放置时间稍长，对于增加质粒产量会有帮助。
2）第一次洗脱可以洗脱出膜上80%左右的DNA。如果用30 μl Buffer KE再洗脱一次，可以把残余的DNA洗脱出来，但是会降低质粒的纯度（不推荐）。
注意事项：
Ø如不慎接触皮肤可立即用大量的洗涤剂和清水清洗。
Ø为了您的安全和健康，请穿实验服并戴 一次性手套操作。
暂无使用说明!
暂无产品问答!
暂无参考文献
扫码关注公众号
中文
英文
